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APP是一种呼吸道寄生菌猪传染性胸膜肺炎的诊断及防治新措施刘建杰，吴斌(华中农业大学牧医学院动物病毒室，武汉 430070) 猪传染性胸膜肺炎，过去曾称为猪接触传染性胸膜肺炎、猪嗜血杆菌胸膜肺炎，英国的Pattison等于1957年首次报道。本病是由胸膜肺炎放线杆菌引起的猪的一种高度接触传染性、致死性呼吸道传染病。急性和亚急性病例以纤维素性出血性胸膜肺炎、慢性病例以纤维素性坏死性胸膜肺炎为主要特征。近年来随着养殖业规模化、集约化的发展，本病的发生呈爆发趋势，对养殖业的危害日益严重。本文结合生产实践，重点介绍了本病的流行病学及诊断防治措施。1 病原学本病病原为胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus P1europeumoniae，APP)。因分离的年代和时间不同，曾称为副溶血嗜血杆菌(H. parahaemolyticus)和胸膜肺炎嗜血杆菌(H. pleuropneumoniae)。APP是革兰氏阴性，有荚膜的多形性小球杆菌，在血液琼脂平板上呈不透明扁平的圆形菌落，其大小为1～1.5mm，周围呈β溶血，用白金耳触之有粘性感，金黄色葡萄球菌可增强其溶血性(CAMP实验阳性)，兼性厌氧，无运动力，生长需要V因子。迄今已发现两个生物型共15个血清型，其中生物Ⅰ型中的1、5、9、10、11五种血清型致病力最强。生物Ⅱ型(13和14)分布于欧洲及美国，其致病性比生物Ⅰ型要弱。目前该病已广泛分布于各主要养殖国，且多数国家为复合型感染。根据近几年的流行病学调查，我国发现或流行的血清型有1、2、3、4、5、7、8、9、10等型，但以1、3、7型为主。免疫学研究证明，主要血清型间缺乏交叉免疫性[6]，这给本病的诊断及疫苗防治带来困难。2 流行病学APP是一种呼吸道寄生菌，主要存在于患病动物的肺部和扁桃体，病猪和带菌猪是本病的主要传染源。本病的发生受外界因素影响很大，气温剧变、潮湿、通风不良、饲养密集、管理不善等条件下多发，一般无明显季节性。研究表明，细菌在4周龄便可定居在猪的上呼吸道，而发病一般在6～12周龄之后的生长育肥猪，尤其是在应激因素存在的条件下，同一猪群可同时感染几种血清型。本病的感染途径是呼吸道，即通过咳嗽、喷嚏喷出的分泌物和渗出物而传播，而接触传播可能是其主要的传播途径。国内外的研究及临床实践表明，猪患呼吸系统疾病时，容易发生继发感染或混合感染。如本病与猪伪狂犬、兰耳病、多杀性巴氏杆菌、肺炎霉形体、嗜血杆菌等病原的混合感染，应引起高度重视。发病率视各地的管理和所采取的预防措施不同，但一般较高（8.5~100％），死亡率根据环境和菌株毒力不同，可在0.4％~100％之间。据近几年各地的发病情况分析，哺乳仔猪发病率与死亡率均高，而生长育肥猪死亡率并不高，仅略高于正常死亡率。本菌在外界环境生存时间较短，一般常用的化学消毒剂均能达到消毒的目的。3 主要致病因子 APP引起猪致病有很多毒力因子，包括溶血毒素、荚膜多糖、脂多糖、蛋白酶、转铁结合蛋白、通透因子及外膜蛋白等。通过对上述毒力因子及其免疫原性成分的分析，发现溶血毒素、荚膜多糖、脂多糖在胸膜肺炎发生过程中扮演着更为重要的角色，也是主要的免疫原性物质。4 主要临床症状本病的病程可分为最急性、急性、亚急性和慢性4种。最急性型：猪群中1头或几头突然发病，并可在无明显征兆下死亡。随后，疫情发展很快，病猪体温升高达41.5℃以上；精神萎顿、食欲明显减退或废食，张口伸舌，呼吸困难，常呈犬坐姿势；口鼻流出带血性的炮沫样分泌物，鼻端、耳及上肢末端皮肤发绀，可于24～36小时内死亡，死亡率高。急性型：病猪精神沉郁，食欲不振或废绝，体温40.5—41℃；呼吸困难，喘气和咳嗽，鼻部间可见明显出血。整个病情稍缓，通常于发病后2～4天内死亡，耐过者可逐渐康复，或转为亚急性或慢性。亚急性或慢性：常由急性转为而来，体温不升高或略有升高，食欲不振，阵咳或间断性咳嗽，增重率降低。在慢性感染群中，常有很多隐性感染猪，当受到其它病原微生物侵害时(如肺炎霉形体、多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌蓝耳病病毒)，则临床症状可能加剧。剖检病变主要见于胸腔，表现为不同程度的肺炎和胸膜炎。5 诊断根据流行病学、临床症状和剖检变化，可作初步诊断，确诊需进行病原学诊断。5.1微生物学诊断：新鲜病料能较容易从支气管、鼻腔分泌物或肺部病变中分离到病原。初次分离可用10％绵羊血液琼脂平板，与表皮葡萄球菌交叉划线，10％CO2温箱过夜培养后，可看到β-溶血的小菌落在划线的附近(需要NAD)生长。然后挑可疑菌落纯培养后作生化鉴定，主要包括CAMP实验、脲酶活性及甘露糖发酵等。利用加有抗生素的选择性培养基进行初代分离较容易，特别是混合感染时。5.2血清学诊断：血清学试验主要用于筛选试验和流行病学的研究。国内外建立了许多血清学方法广泛用于该病的检测。如平板凝集试验，协同凝集试验，试管凝集试验，乳胶凝集试验，补体结合反应，间接血凝试验，荧光抗体，酶联免疫吸附试验(ELISA)等，常用的有补体结合反应、ELISA、间接血凝试验等。在我国，已建立的血清学诊断方法有：补体结合反应， ELISA，间接血凝等，其中间接血凝基层应用较为广泛。我们实验室利用表达的毒素已经建立了胸膜肺炎的毒素ELISA检测方法，敏感、快速，适用于大规模的流行病学调查。5.3 分子生物学诊断: 主要是PCR方法在诊断上的应用，该方法发展迅速，目前国外已建立了多种PCR的检测方法。有的可用于细菌分离物的鉴定，有的也可直接从病料中扩增出病原，特异、敏感、快速，无疑是诊断此病的最佳选择。我们实验室目前建立的一种PCR方法，病料经处理后能直接进行PCR扩增，极大缩短了诊断周期，方便了该病的诊断。5.4 鉴别诊断：主要与猪支原体肺炎、肺炎型巴氏杆菌病、副猪嗜血杆菌病及伪狂犬、蓝耳病相区别。支原体肺炎一般表现为咳嗽与气喘，剖检主要表现为肺部两侧对称性的肉样变或胰变，一般不引起死亡；而多杀性巴氏杆菌肺部感染病变多在前下部，而胸膜肺炎的肺部感染部位多在后上部且有局灶性的纤维素性胸膜炎；副猪嗜血杆菌病的发病有多系统性。伪狂犬及蓝耳病的诊断要结合猪群的发病的流行病学及血清学病原学的检测。6综合防制6.1免疫接种：疫苗是控制猪胸膜肺炎放线杆菌感染的有效手段。目前市场上有亚单位苗和灭活苗出售，每种疫苗都有不足之处，不能抵抗所有血清型的攻击，不能消除患病动物的带菌状态。近来各国都在积极探索基因缺失弱毒苗对胸膜肺炎的保护效果，有望取代目前的灭活苗，因为基因缺失弱毒苗的交叉保护力更强，初步的动物实验表明可抵抗多数血清型的攻击。在我国，根据近几年的流行病学调查和病原分离工作，华中农业大学研制出APP 1、7两种血清型加上地方流行菌株的多价灭活苗，免疫猪保护率达85％以上，有效免疫持续半年以上，在规模化养猪场应用效果显著。同时华中农业大学根据各场家的要求做的自家苗或组织苗，配合药物，能很好的控制该病，对血清型不明的场家尤为有效。6.2药物预防：根据近来国内外的用药情况及我们实验室的药敏实验结果，猪胸膜肺炎放线杆菌对Ceftiofur（头孢噻夫）、Tilmicosin(地米考星)、Florfcnicol(氟甲砜霉素)、先锋霉素、环丙沙星、单诺沙星、恩诺沙星、四环素、氯霉素、庆大霉素、卡那霉素等较敏感。金霉素与泰乐菌素的联合用药在临床上使用也较多。对有明显临床症状的发病猪，可用首选药物进行口服和注射同时给药，具有良好的效果。对未发病猪群在饲料或饮水中添加给药，先用治疗剂量给药数天后，改用预防量给药数周或数月可控制此病的发作。根据资料报道，细菌会产生抗药性，且不同的菌株产生的耐药性也不相同。因此，在本病的防治过程中，对用于预防的药物应有计划地定期轮换使用，最好做药敏实验。6.3综合防治：注意预防伪狂犬、猪瘟、兰耳病、支原体肺炎、副猪嗜血杆菌等疾病。这些疾病或破坏猪的免疫系统，或破坏猪肺脏的防御功能，从而使猪只对APP的易感性增加，因而一定要做好这些疾病的免疫预防工作。猪舍及环境均定期消毒，减少病原微生物的生存。减少猪的应激，改善和加强饲养管理，采用全进全出的饲养方式，感染前两周免疫，使用对应血清型。总之，对于呼吸道疾病的控制应以免疫预防为主，并结合综合性的防治措施。
