冷冻胚胎的影响
1972年Wilmut&Whittingham使用DMSO(Dimethyl Sulphoxide)进行使胚冷冻，以慢速冷冻及慢速解冻的方式可以 得到存活鼠胚，植入体内并可以成功形成鼠胎‧
1983年Trouson&Mohrreu将其应用至人类胚胎，成为第一例胚胎经冷冻保存解冻后产下的胎儿‧
冷冻伤害
1.冰晶
不论在冷冻任何细胞的过程中，最怕的就是细胞内的水分形成体积较大的冰晶(ice crystal)，而因此破坏了细胞内的胞器、纺锤体或细胞骨架，进而影响细胞正常功能，严重时会使细胞无法存活。
（Kasai, 1996; Glenister et al., 1987）
2.最大冰晶生成带
细胞在冷冻降温时会有变化，当温度降至-1℃--5℃时，细胞内的水会结冰成冰晶，这个温带称为“最大冰晶生成带”。
冷冻速度的快慢使冰晶生成的大小不同，时间越短冰晶越小；冷冻速度越慢，通过温度时间就长，生成的冰晶就大，会刺破细胞膜，一旦解冻，细胞内溶质就会流失
3.渗透压的改变
冷冻过程水分会自细胞内渗到细胞外，因此会造成细胞内电解质的失衡因而对细胞产生伤害‧
4.温度
细胞内液体因冷冻解冻而发生相的改变，引起能量释出与温度剧烈变化，造成细胞伤害‧
目前是加入冷冻保护剂，和改善冷冻技巧‧（Rall, 1987）
5.冷冻保护剂
哺乳动物胚若无经过冷冻保护剂（cryoprotective agent, CPA）处理的情况下，是难以在低温的状况下存活。因此，适当的选择冷冻保护剂对胚的冷冻保存是非常重要的步骤。冷冻保护剂可依对细胞膜之渗透能力而分成渗透性（permeating）与非渗透性（non permeating）冷冻保护剂
6.渗透性冷冻保护剂
（1）毒性
（2）渗透性
（3）平衡时间
（4）温度
7.非渗透性冷冻保护剂
（1）糖类
（2）巨分子物质（macromolecules）
（3）抗冻蛋白（antifreezing protein, AFP）
（4）细胞骨架稳定剂（cytochalasin B）
以往的冷冻方法多是利用慢速冷冻（Slow freezing），方式是缓慢增加冷冻保护剂的浓度，在程式化系统梯度降温及利用『人工植冰』（seeding）控制结冰方向，使细胞外水分相对减少、电解质浓度相对增高，而逐渐置换掉细胞内的水分，使其尽量脱水，两种冷冻方法各有其优缺点‧近年由于玻璃化冷冻的研发，其解冻后胚胎的高存活率略胜一筹，目前大部分皆已全面采用玻璃化冷冻解冻技术来囊胚期胚胎。
A慢速冷冻
由于胚胎内含有水分，因此在冷冻时会形成冰晶进而造成细胞的破坏，因此在冷冻前需先进行细胞脱水。
但是当细胞脱水时，细胞内溶质的浓度亦相对增高，这对于细胞会造成不利的影响。
因此，冷冻之前的胚胎要浸泡在含有蔗糖、甘油、DMSO等冷冻保护剂中，利用低浓度慢慢增加浓度处理胚胎，逐步降低温度后，再将胚胎保存在-196℃的液态氮中。
在胚胎和冷冻保护剂达成平衡后，以电脑控制的冷冻仪让胚胎的温度缓慢的下降至-30℃左右，然后再保存于-196℃之液态氮中，就可以长期保存。在解冻时取出吸管加热，用与冷冻时相反的步骤，放回培养液中。
B玻璃化冷冻(Vitrification)
利用高浓度的冷冻保护剂，将细胞内水份脱水至细胞外，然后直接将胚胎置入-196℃的液态氮中，细胞内的物质瞬间变成高黏稠固态的玻璃状物质，细胞内冰晶形成最少的状态下冰冻起来。
解冻时直接将含胚胎的容器以37℃解冻，然后再分2至3个步骤将冷冻保护剂从细胞内移出至细胞外。
